DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA MOLECULAR
Responsable: QBA. Vicente Felipe Cardenas Lara
PRUEBAS DE REACCIÒN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Y PCR EN TIEMPO REAL (PCR TR) QUE SE REALIZAN EN EL DEPARTAMENTO (*VER TIPO DE MUESTRA):
1. Detección de organismos patógenos como bacterias y virus que puedan repercutir en la producción animal.2. Tipificación de aislamientos bacteriológicos para determinar si pertenecen a una especie determinada.
3. Deteccion de organismos del complejo Mycbacterium tuberculosis (el cual incluye en las especies M. bovis, M. tuberculosis, M. africanum, M. microti, M. caprae y M. pinnipedii) en muestras de tejido fijado en formol y embebido de parafina.
4. Tipificación de aislamientos de mico bacterias para determinar si pertenecen al complejo M. tuberculosis.
5. En la actualidad la prueba PCR TR es empleada para la detección del virus de PRRS y la bacteria de Brucella abortus.
EQUIPO RELEVANTE CON QUE CUENTA EL DEPARTAMENTO
- Campana de flujo laminar clase ll
- Estación de trabajo
- Cámaras de electroforesis
- Fotodocumentador
- Termoblok
- Termociclador
- Centrífuga refrigerada
- Purificador de agua
- Amplificador de DNA Tiempo Real Genesic
- Kit de trabajo
- Primers
PROCEDIMIENTO DE ANALISIS
A treinta años de la aparición de la reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR por sus siglas en inglés) es una de las herramientas tecnológicas más innovadoras para el estudio de los ácidos nucleicos. Se caracteriza por tener una técnica de alta sensibilidad, reproducibilidad y eficiencia, que genera resultados confiables
La técnica de PCR se utiliza para hacer múltiples copias de un fragmento de ADN de interés generando una gran cantidad de copias a partir de una muestra inicial pequeña. La amplificación de segmentos de ADN hace posible la detección de bacterias patógenas entre otras aplicaciones. Esto se logra extrayendo el ADN de la muestra (ADN molde) y utilizando oligonucleótidos sintéticos o primers los cuales a través de la acción de la enzima polimerasa y bajo condiciones de temperaturas especificas logran añadir nucleótidos a las secuencias complementarias del ADN molde para generar copias de ADN (amplicones) de la zona de interés a través de ciclos repetidos de polimerización. Los amplicones o productos de la PCR se separan por electroforesis al aplicar un campo electromagnético sobre un gel de agarosa. El resultado se analiza tiñendo el gel y visualizándolo con luz ultravioleta.
Actualmente, el panorama de la PCR promete cumplir con las expectativas de los productores, así como de los profesionales que los asesoran, tan es así que ahora la modalidad de la PCR en Tiempo Real ofrece la gran ventaja de usar un sistema cuantitativo.
*MUESTRAS
1. Las muestras deberán ser aptas para el diagnóstico, es decir que sean de preferencia frescas o en su defecto bien conservadas.
2. Las muestras son las cepas sospechosas de Brucella aisladas en el departamento de Microbiología Nivel III.
3. Las muestras deberán ser aptas para el diagnóstico histopatológico. Deberán llegar conservadas en formol al 10%, a temperatura
ambiente o en refrigeración. Asimismo, las muestras también podrían ser enviadas fijadas en formol al 10% y embebidas en bloques de parafina.
4. Las muestras son las cepas de micobacterias aisladas en el departamento de Microbiología NIvel III.
5. Entre las muestras que se pueden trabajar para PRRS están sangre, suero y fluidos orales; y para la detección de Brucella, leche, queso y tejido.
LCRM© 2016
.jpg)
QBA. Vicente Felipe Cardenas Lara
Biol Alejandrina Sosa Andrade
Electroforesis
Fotodocumentador
